豬藍(lán)耳病又名豬流行性流產(chǎn)和呼吸綜合征，該病病原體為Lelysted病毒，呈卵形、有囊泡、直徑在40-60 nm之間，表面有約5 nm大小凸起，基因組為單股正鏈RNA病毒，該病毒PRRSV基因組具有較強(qiáng)的變異性，傳染性強(qiáng)具有地方流行性，我國(guó)將其列為二類傳染病，在防治該病的過程中首先需要快速診斷和檢測(cè)藍(lán)耳病病毒，在檢測(cè)藍(lán)耳病病毒時(shí)需要統(tǒng)yi的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

冷凍干燥機(jī)FDU-1200

冷阱溫度-45 ℃

除濕量1 L

采用便捷式設(shè)計(jì)、可置于實(shí)驗(yàn)桌上，操作簡(jiǎn)單可分別采用手動(dòng)和自動(dòng)運(yùn)行模式，方便科研人員開展大量的實(shí)驗(yàn)工作。

實(shí)驗(yàn)過程

步

將滅活后的病毒液制備藍(lán)耳病病毒核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，將純化后的病毒進(jìn)行無菌檢測(cè)、外源性病毒檢測(cè)。

第二步

將凍干保護(hù)劑與藍(lán)耳病病毒液混合搖勻后，移液分裝至10支容量為3 mL的具十字橡膠塞的無菌瓶中（十字塞的十字部分插入瓶中，塞冒懸于瓶口），每支1 mL試樣。

第三步

將10支分裝好的試樣瓶置于-80 ℃的預(yù)凍30 min后取出，預(yù)凍后樣品瓶置于冷阱溫度已達(dá)-45 ℃的凍干倉(cāng)中，運(yùn)行真空泵開始凍干，一直到樣品質(zhì)量不發(fā)生變化時(shí)凍干結(jié)束并在真空狀態(tài)下壓蓋密封十字橡膠塞，得到凍干后的樣品。

第四步

采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)藍(lán)耳病病毒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性、穩(wěn)定性，得到藍(lán)耳病病毒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)也為該病毒定性和定量檢測(cè)提供標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。